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背景：

细胞周期是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可以分为间期和有丝分裂期，细胞间期常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。随着细胞在细胞周期中的进展，G1期细胞具有一组配对的染色体，并且就DNA含量而言是均一的。 另一方面，在S期期间DNA的量开始加倍，因此DNA的量是G1中的量的1-2倍。 与G1中的细胞和两组配对的染色体相比，G2 / M期的细胞具有两倍的DNA量

标记：

1.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。

2.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得1×EdU溶液。

【注】：①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度。②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。

3.孵育细胞2 h，弃培养基。

【注】：①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。

4.以1xPBS清洗细胞两次，每次5 min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。

【注】：对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。

实验步骤：

1. 将细胞以 104-105 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板 中，加入 100μL 培养基，含或不含待测化合物。在 CO2 培养箱中在 37℃ 下培养细胞 24 小时。

2. 向板中加入 10μL 不同浓度的待测物质。

3. 在培养箱中将培养板培养适当时间（如 6、12、24 或 48 小时）。

4. 向板的每个孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要将气泡引入孔中。

5. 将平板在培养箱中孵育 1-4 小时。

6. 在读板之前，在定轨振荡器上轻轻混匀。

7. 使用酶标仪测量 450nm 处的吸光度。

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