细胞培养操作：

收货处理取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态

传代密度细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代代数可传5代左右；3代以内状态最佳

传代比例传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

传代方法

1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3.用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4.待细胞贴壁后，培养观察；之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。

CO₂ 独立培养基二氧化碳独立培养基采用磷酸盐缓冲体系。配方中含有少量以满足必需的碳酸氢盐依赖性功能。由于不使用合成缓冲液如Hepes，因此消除了与此类缓冲系统相关的细胞毒性效应。另外，该培养基的优化配方可提高细胞生产和 CO2 利用率，因此无需外源性 CO2 即可维持 CO2 依赖性细胞功能。

二氧化碳独立培养基用于支持各种悬浮和贴壁的哺乳动物细胞生长，例如上皮细胞、成纤维细胞和淋巴样细胞系，而不需要 CO2 培养箱。

该培养基是在大气条件下运输细胞或组织以及处理小鼠胚胎的理想选择。如需长期培养，建议使用传统标准二氧化碳依赖型培养基。

本产品使用注射用水（Water-For-Injection）配置。

培养基主要成份表

含有（＋）

（＋）  D-葡萄糖

（＋）  丙酮酸钠

（＋）  酚红

不含（－）

（－）  HEPES

运输

放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法

基础培养基2℃～8℃，培养添加剂 -20℃，避光，保存12个月。配置好的培养基2℃～8℃保存1-2个月。

质量控制

注意事项

1、收到产品请先检查包装是否完好，如有破损，漏液、浑浊等现象请及时联系我们，培养基冻融后，可能会有少量絮状物析出，不影响产品正常使用。

2、请仔细阅读产品说明书，了解产品使用方法、保存方式、有效期等信息，若因操作失误，保存不当而导致产品出现污染等问题的，责任由客户自行承担。

3、本产品仅能用于科研，培养基中的一些组分对人体有较低的危害性，如有接触立即用大量清水冲洗即可。

细胞培养概念：

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。

细胞培养可分为原代培养和传代培养；直接从体内获取的组织细胞进行培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器（同样底面积的容器）中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

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