商品属性:
产品名称 | 重组小鼠血管内皮生长因子120VEGF 120 | 英文名称 | Mouse VEGF 120 Protein |
规格 | 10 μg/50 μg/500 μg | 货号 | EY-01X8666 |
运输条件 | 蓝冰运输 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
背景:
血管内皮生长因子,又称血管通透性因子(VPF)和血管内皮生长因子-A,是胎儿和成人血管生成和血管形成的有效介质,是血小板衍生生长因子(PDGF)/血管内皮生长因子(VEGF)家族的成员,通常以二硫键连接的同源二聚体形式存在。VEGF-A蛋白是一种糖基化的有丝分裂原,专门作用于内皮细胞,具有多种效应,包括介导增加血管通透性,诱导血管生成、血管生成和内皮细胞生长,促进细胞迁移、抑制细胞凋亡和肿瘤生长。VEGF-A 蛋白也是一种血管扩张剂,能增加微血管的通透性,因此初被称为血管通透因子。
标记:
1.将细胞培养基与EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU标记培养基。
2.提前将2×EdU标记培养基预热,然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合,获得1×EdU溶液。
【注】:①不建议替换全部培养基,这样可能会影响细胞增殖的速度。②配置好的培养基建议现用现配,用量以没过细胞为宜。
3.孵育细胞2 h,弃培养基。
【注】:①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。
4.以1xPBS清洗细胞两次,每次5 min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。
【注】:对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。
实验步骤:
1. 将细胞以 104-105 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板 中,加入 100μL 培养基,含或不含待测化合物。在 CO2 培养箱中在 37℃ 下培养细胞 24 小时。
2. 向板中加入 10μL 不同浓度的待测物质。
3. 在培养箱中将培养板培养适当时间(如 6、12、24 或 48 小时)。
4. 向板的每个孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要将气泡引入孔中。
5. 将平板在培养箱中孵育 1-4 小时。
6. 在读板之前,在定轨振荡器上轻轻混匀。
7. 使用酶标仪测量 450nm 处的吸光度。
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