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ATP柠檬酸裂解酶(ACL)生化检测试剂盒

型 号

产品时间2023-11-06

所属分类脂肪酸代谢系列

报价300

产品描述:ATP柠檬酸裂解酶(ACL)生化检测试剂盒高密度脂蛋白为血清蛋白之一,主要由肝脏合成,运载周围组织中的,再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出,是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白,是冠心病的保护因子,俗称“血管清道夫",对冠心病的临床诊断是一个重要的参考指标。

产品概述

商品属性:

产品名称:ATP柠檬酸裂解酶(ACL)生化检测试剂盒

规格:100/96 50/48 

货号 : EY-01S1198

测试方法:微量法 紫外分光光度法  

分类:脂肪酸代谢系列

商品详情:

测定意义

高密度脂蛋白为血清蛋白之一,主要由肝脏合成,运载周围组织中的,再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出,是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白,是冠心病的保护因子,俗称血管清道夫",对冠心病的临床诊断是一个重要的参考指标。

测定原理

用沉淀剂分离血清中的高密度脂蛋白,利用酯酶催化酯水解生成游离和游离脂肪酸,从而把酯转化为FC;进一步利用氧化酶催化FC氧化,生成△4-胆甾烯酮和H2O2;再利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基和酚,生成红色醌类化合物;在500nm有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品

离心机,恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

粗酶液提取:

1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。


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ADH测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

3、操作表:

试剂名称μL

测定孔

样本

20

试剂二

760

试剂三

10

试剂四

10


将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中,混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2,计算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需将样本用提取液稀释,使A1-A2小于0.5,可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

NAD-MDH活力单位的计算:

1、血清(浆)NAD-MDH活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总)÷T=3.215×ΔA

V反总:反应体系总体积,8×10-4 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;2000:细胞或细菌总数,2000万。

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