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    青海发光杆菌成活率形态学观察法及检测法

    点击次数:1055  更新时间:2017-11-16

    青海发光杆菌成活率,判断之形态学观察法:

    1、细胞内出现颗粒或空泡。

    2、细胞内如果出现颗粒物质,表明细胞处于非健康状态。

    3、同样,细胞内出现空泡也说明细胞处于非健康状态。

     细胞丧失双折射性:

        如果发生在单层细胞:一个具有双折射性的正常细胞逐步失去这一特征(相差显微镜下细胞边缘成晕环),则提示该细胞已经死亡,即zui终干枯死亡。

        如果发生在悬浮细胞:正常悬浮细胞清晰透明,如胞内出现颗粒或变浑浊表明细胞受损,甚至死亡。

        怎样去除死细胞?单层培养的细胞死亡后,一般会漂浮起来,因此不需要特殊处理。

    而悬浮细胞或原代培养细胞则要通过密度离心(如Ficoll梯度)方法收集死细胞。

    细胞成活率检测实验

    即刻检测实验——

    染料柜染实验:原理——萘黑、台盼蓝以及很多其他染料均不能透过活细胞。概要——将细胞悬液与染料混匀,在低倍显微镜下检查。材料包括无菌材料,即细胞;生长液;0.25%胰酶;PBSA.非灭菌材料即:血细胞计数板;生存力染料;巴斯德吸管;显微镜;手执计数器。

    操作步骤:

    1、用胰蛋白酶消化或离心,重悬制备高深度的细胞悬液

    2、取一块干净的血细胞计数板,将盖玻片固定在适当位置上。

    3、将一<滴细胞悬液和一滴(台盼蓝)或四滴(萘黑)染料混匀/li>

    4、加至血细胞计数板的计数室中。

    5、静置1~2min(但不要放置很久,否则活细胞会受到损伤而吸收染料)。

    6、将计数板置于显微镜下,用10倍物境找到计数网格。

    7、青海发光杆菌计数细胞总及着色细胞的数目。

    8、清洗血细胞计数板,放入盒内。
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    青海发光杆菌

     

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