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青海发光杆菌溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的zui大吸收峰。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。

（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管。

（三）试剂：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉。

三、实验步骤

1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。2. 称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。3. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，zui后连同残渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。zui后用乙醇定容至25ml，摇匀。5. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。

四、实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.9665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。zui后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：

     青海发光杆菌的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。
5-巯基-1-甲基四氮唑 98％    13183-79-4    CAS号：    5-Mercapto-1-methyltetrazole    英文名称：
5-噻唑甲醛    1003-32-3    CAS号：    Thiazole-5-carboxaldehyde    英文名称：
5-叔丁基-1,3-苯二羧酸    2359/9/3    CAS号：    5-TERT-BUTYLISOPHTHALIC ACID    英文名称：
5-叔丁基-2-羟基苯甲醛    2725-53-3    CAS号：    5-TERT-BUTYL-2-HYDROXY-BENZALDEHYDE    英文名称：
5-硝基尿嘧啶;5-硝基;5-硝基-2,6-二羟基嘧啶;2,4-二羟基-5-硝基嘧啶    611-08-5    CAS号：    5-Nitrouracil;2,4-Dihydroxy-5-nitropyriMidine    英文名称：
青海发光杆菌