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    研讨亮发光杆菌检测法

    点击次数:837  更新时间:2018-01-30

    亮发光杆菌基因现已整合到银耳基因组中;RT-PCR成果显现,在银耳细胞中可以动物ELISA试剂盒检测到人胰岛素基因的mRNA;Southern杂交成果表明人胰岛素基因以单复制的方式整合到银耳基因组DNA中。本试验经过设置农杆菌与银耳芽孢不同共培育时刻、诱导剂乙酰丁香酮的浓度、银耳芽孢及农杆菌ELISA试剂盒浓度等要素对转化功率影响,成果在乙酰丁香酮浓度为500μmol/mL、银耳芽孢浓度为108个/mL、农杆菌OD=0.5及共培育时刻为2d时,转化功率zui高,为310个转化子/108个银耳芽孢。转化子转接5代后对潮霉素仍有抗性,说明外源基因在银耳芽孢中可以不乱遗传。在试验室已开始树立的农杆菌EHA105介导银耳转基因办法的基础上。
    ELISA试剂盒以银菌株Tr21-01为动身菌株,经过冻融法将带着有潮霉素磷酸转移酶(Hph)基因为遗传符号及人胰岛动物ELISA试剂盒素基因(BAC)为意图基因的质粒pBHg-BCA导入根癌农杆菌GV3101,LBA4404和AGL-1中,并进一步介导转究。试验结L-1具有较高的转化率;GV3101转化率较低,且假阳性较高;LBA4404无抗性菌落长出。此成果表明不同的农杆菌侵染银耳芽孢才能具有差异性,且对受体侵染具有一定的特异性。本试验以农杆菌EHA105为参照菌株,亮发光杆菌对农杆菌AGL-1介导转化银耳进行研究。基于农杆菌介导转基因受许多要素的影响,本试验从农杆菌与银耳芽孢共培育时刻、银耳芽孢浓度、农杆菌浓度、诱导剂乙酰丁香酮(AS)的浓度、转率等方面进行优化。ELISA试剂盒其转化条件优化成果为:AGL-1菌液OD值为0.4~0.5,AS诱导培育浓度为250μg/mL、共培育浓度为150μ耳芽孢浓度为10~8/mL,共培育72h转化率zui高,可达500个/10~8,且阳性菌落为89%;EHA105菌液OD值为0.4~0.5。
    1967/3/8        盐酸硫胺标准品    500mg
    1961/12/1    Dibucaine Hydrochloride    盐酸地布卡因标准品    500mg
    1959/5/2    Methotrexate     甲氨蝶呤标准品    500mg
    1957/11/4    Stearic Acid     硬脂酸标准品    500mg
    1957/10/3    Palmitic Acid     棕榈酸标准品    500mg
        5-Adenylic Acid    5-腺嘌呤核苷酸标准品    500mg
            纯化葡萄籽低聚原花青素标准品    500mg
        Purified Guggul Extract    纯化香胶树提取物标准品    500mg
        Lycopene     番茄红素标准品    500mg
        Powdered Forskohlii Extract    弗司可林粉末提取物标准品    500mg
    亮发光杆菌

     

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