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青海发光杆菌目的基因的敲除采用同源重组的方法。本实验首先利用谷氨酰胺合成酶基因glnA上下游引物glnA-FW和glnA-RV扩增出glnA基因序列，大小为1335 bp。然后将其连接到pMD19-T质粒上，构建质粒pMD19T-glnA。同样的，利用引物NEO-FW和NEO-RV扩增出新霉素抗性基因Neo，并将其连接到pMD19-T载体上，构建质粒pMD19T-Neo。将质粒pMD19T-glnA和pMD19T-Neo均用NcoⅠ和PstⅠ酶进行双酶切，酶切后的新霉素片段连接到经同样酶切的pMD19T-glnA质粒上，构建敲除质粒pMD19T-ΔglnA∷Neo。zui后将敲除质粒pMD19T-ΔglnA∷Neo转化进入枯草芽孢杆菌WB600中进行同源重组，在新霉素平板上筛选正确的转化子。
青海发光杆菌将重组菌接种于20 mL LB液体培养基中，37℃、200 r/min过夜活化。按照初始OD600 0.1的添加量转接于30 mL LB液体培养基中，37℃、200 r/min培养36 h，期间每隔2 h取样1次测定菌体浓度，zui后一次取样间隔为4 h。菌体浓度的测定以分光光度计600 nm波长下的吸光值OD600表示。OD600根据下列公式转化为细胞干重：1 OD =0.35 g/L DCW。
Palmitic acid    20mg/支    1957/10/3    棕榈酸
Phellodendrine chloride    10mg/支    104112-82-5    盐酸黄柏碱
Magnoflorine iodide    10mg/支    2141/9/5    碘化木兰花碱
(-)-Syringaresnol-4-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside    10mg/支    136997-64-3    (-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷
含量测定    20mg    110703-200726    人参皂苷Rgl
含量测定    1ml    110707-201011    水杨酸甲酯
含量测定    0.5ml    110710-201016    桂皮醛
含量测定    20mg    110712-201010    盐酸水苏碱
含量测定    20mg    110717-200204    靛玉红
含量测定    20mg    110718-200507    酯蟾毒配基
含量测定    100mg    110728-200506    薄荷脑
青海发光杆菌