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伞枝梨头霉PCR试剂盒的设计引物应遵循哪些原则

点击次数:107  发布时间:2020-11-25
   伞枝梨头霉PCR试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有的成分。现代食品加工工艺改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性,因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性,因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。
 
  特点:
  1.即开即用,用户只需要提供病毒DNA模板。
  2.引物经过优化,灵敏性比使用世界动物卫生组织推荐的引物高100倍以上。
  3.特异性高,引物是根据保守的vp72基因设计。
  4..提供阳性对照,便于分析实验结果。
  5.PCRmix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。本试剂盒足够做40μL体系的PCR50次,只能用于科研。
 
  伞枝梨头霉PCR试剂盒设计引物应遵循以下原则:
  ①引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。
  ②引物扩增跨度:以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
  ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
  ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
  ⑤引物3’端的碱基,特别是倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
  ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子很有好处。
  ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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