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    耐药细胞的特性和操作要点有哪些

    点击次数:1270  更新时间:2020-12-28
       耐药细胞的特性:
      1)细胞来源于人正常口腔黏膜组织。
      2)细胞鉴定:Vimentin免疫荧光染色为阳性。
      3)经鉴定细胞纯度高于90%。
      4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
      5)细胞生长方式:不规则细胞,长梭形,贴壁培养。
     
      耐药细胞的操作要点:
      1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
     
      2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
     
      3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
     
      4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
     
      5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
     
      6)产品仅用于科研观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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