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    PCR检测试剂盒DNA复制用三个步骤的实现方法

    点击次数:2018  更新时间:2021-03-20
       PCR检测试剂盒的实验室检查:
      一般检查
      血常规:部分病例可有白细胞和血小板减少。
     
      血清学检查
      1.寨卡病毒IgM检测:采用酶联免疫吸附法、免疫荧光法等进行检测。
      2.寨卡病毒中和抗体检测:采用空斑减少中和试验检测血液中和抗体。应尽量采集急性期和恢复期双份血清开展检测。
      寨卡病毒抗体与同为黄病毒属的登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒抗体等有较强的交叉反应,易于产生假阳性,在诊断时应注意鉴别。
     
      病原学检查
      1.病毒核酸检测:采用荧光定量RT-PCR检测寨卡病毒。
      2.病毒抗原检测:采用免疫组化法检测寨卡病毒抗原。
      3.病毒分离培养:可将标本接种于蚊源细胞或哺乳动物细胞等方法进行分离培养,也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
     
      PCR检测试剂盒DNA复制用三个步骤的实现方法是:
      1、变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,为下轮反应作准备;
      2、退火:退火也叫复性,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,在这个温度下,模板DNA单链能够与引物的互补序列配对结合;所谓引物,是一段已经确定好的DNA的片段,通过引物找到模板DNA的相应位置,也就是确定了复制的起点;
      3、延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸,可构成DNA)为反应原料,靶序列为模板,按照碱基互补配对原则和半保留复制原理,就能合成一条新的与模板DNA链互补的复制链。
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