NADP磷酸酶(NADPase)样本的前处理:
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
① 准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g,4℃离心5min。
③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11100g,4℃离心10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的 NOX(此步可选做)。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于NOX活性测定。
血清(浆)样品:直接检测。
试剂盒性能:
准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
灵敏度:zui低检测浓度小于10 pg/ml。
特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
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