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    视网膜上皮细胞作步骤

    点击次数:202  更新时间:2024-05-30

    视网膜上皮细胞;操作步骤:

    1、贴壁细胞的消化

    ①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。

    ②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。

    ③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变

    化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的  *细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。

    ④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

    ⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。

    2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。

    冻保存细胞之方法

    冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 储存。

    冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


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