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    细胞培养操作

    点击次数:253  更新时间:2024-06-24
    细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。(由此便引申出了后来的有限细胞系(FiniteCellLine)、无限细胞系(InfiniteCellLine)),因此,细胞系狭义的是指可连续传代的细胞(特定环境下口语和书面语都使用),广义是指可传代的细胞。
    细胞传代:
    a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    b、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000rpm离心5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
    c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 
    细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000rpm条件下离心4min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
    b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱,24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
    复苏细胞:
    将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4mL培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心3min,弃去上清液,加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
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