收到细胞后，首先观察瓶身是否完好（注意有无缝隙，裂痕）；显微镜下观察细胞的生长状况，有无细胞漂浮；用新洁尔灭消毒瓶口及瓶身；打开瓶口，再次用新洁尔灭消毒瓶口（可能会有液体溢出，注意不要碰到液体），酒精灯烤瓶口消毒；将培养液转移至50ml离心管或广口瓶中（若细胞漂浮严重，离心培养基，1000g*5分钟，将离心后的培养基转移至另一个大离心管中，留一点吹打细胞沉淀成悬液，回收细胞至原培养瓶），若漂浮不严重，亦离心一下；在原培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如4ml，让细胞适应一下环境。 当细胞长到70-80%，冻存大部分，小部分传代。
关键操作规范：
复苏流程：
快速解冻：37℃水浴中摇晃冻存管，5-10分钟内完成，加入4-6mL培养基离心去除DMSO37。
初始接种：细胞悬液置于T25瓶或6cm皿，24小时内贴壁伸展，48小时换液。
日常维护：
换液频率：每周2-3次，pH值稳定在7.0-7.4。
污染防控：严格无菌操作，定期检测支原体，使用双抗预防细菌污染。
异常处理：
贴壁失败：复苏24小时未贴壁的细胞存活率下降30%-50%，需弃用。
消化成团：吹打力度需轻柔均匀，避免机械损伤。
注意事项：
1)细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
2)对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
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