BHK-21细胞的培养需要特定的条件以确保其健康生长：
培养基：通常使用含有10%胎牛血清（FBS）DMEM或RPMI-1640培养基。
温度与气体环境：维持在37℃，5% CO2的培养箱中。
传代方法：当细胞密度达到80%-90%时，需进行传代。具体步骤包括弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，随后加入消化液（如0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于37℃消化1-2分钟，直至细胞大部分变圆并脱落，最后加入含10%血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，离心后重悬并分配至新的培养瓶中。
在成功传代后，BHK-21细胞的生长状态需密切观察。通常，细胞在传代后24小时内会重新贴壁，并在48-72小时内进入对数生长期。若细胞贴壁不良或生长缓慢，可能需检查培养基成分是否失效，或培养箱的CO2浓度及湿度是否稳定。
对于长期培养的BHK-21细胞，建议定期检测支原体污染，并避免频繁更换培养基批次，以减少细胞适应性的波动。此外，冻存细胞时推荐使用含10% DMSO的冻存液，以缓慢降温（如程序冻存盒）的方式保存于液氮中，确保细胞复苏后的存活率。
在实验应用中，BHK-21细胞常用于病毒增殖、重组蛋白表达等研究。为提高外源基因的转染效率，可采用脂质体转染或电穿孔法，但需优化条件以避免细胞毒性。若用于病毒包装，需注意细胞密度控制在60%-70%，以确保感染效率。
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