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人结蛋白检测前的样本处理是确保检测结果准确可靠的关键环节，核心步骤包括组织样本的及时固定、液体样本的规范分装与溶血样本的预处理‌。任何操作偏差都可能导致抗原降解或背景干扰，进而引发假阴性或假阳性结果。

一、组织样本：离体后立即固定，防止蛋白降解

人结蛋白（Desmin）是一种中间丝蛋白，易受蛋白酶作用而快速降解。

‌操作要求‌：

组织离体后 ‌10分钟内‌ 放入 ‌10%中性福尔马林‌ 中固定；

固定液用量应为组织体积的 ‌10倍以上‌，确保充分渗透；

固定时间通常为 ‌6–24小时‌，避免过度固定导致抗原掩蔽。

‌后续处理‌：

石蜡包埋前需脱水、透明；

切片进行免疫组化或抗原修复时，需控制热修复条件，防止非特异表位暴露 。

 提示：若用于Western Blot或ELISA，可将部分组织直接冻存于-80℃，但需加入蛋白酶抑制剂。

二、血清/血浆样本：分装保存于-80℃，避免反复冻融

液体样本中人结蛋白含量极低，稳定性差，需精细化管理。

‌采集与分离‌：

血液采集后室温静置 ‌30分钟‌，3000×g离心 ‌10分钟‌ 分离血清；

使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激 。

‌保存规范‌：

按 ‌单次使用量分装‌（如50–100 μL/管），标记后立即置于 ‌-80℃超低温冰箱‌ 保存；

‌严禁反复冻融‌，否则会导致蛋白聚集或降解，影响检测灵敏度。

‌解冻要求‌：

使用前在 ‌冰上缓慢解冻‌ 或室温轻柔融化，避免37℃加热；

解冻后轻柔混匀，离心（3000×g, 5分钟）去除可能沉淀物。

三、溶血样本：离心去除碎片，降低背景干扰

溶血会释放大量血红蛋白和胞内酶，严重干扰ELISA等显色反应。

‌识别标准‌：

血清/血浆呈现 ‌粉红至深红色‌，提示不同程度溶血；

严重溶血样本不宜用于定量检测，建议重新采样。

‌处理方法‌：

对轻度溶血样本，可进行 ‌二次离心‌（3000–5000×g, 10分钟），取上清使用；

若仍存在浑浊，可考虑 ‌过滤‌（0.22 μm滤膜）或 ‌稀释后检测‌，但需注意稀释对灵敏度的影响；

ELISA检测时可适当 ‌增加洗板次数‌，降低非特异结合背景 。

注意：重度溶血样本（明显红色或褐色）‌不建议用于人结蛋白检测‌，因血红蛋白可能直接干扰HRP酶活性，导致假阳性 。