Anti-ACA11是低丰度膜蛋白，反复冻融会对样本和检测结果造成明确的负面影响，核心影响按冻融次数递增：
1~2次冻融：仅10%~30%的靶标降解，对结果影响较小，一般仍可检出信号，仅灵敏度略有下降；
3次及以上冻融：超过50%的ACA11发生降解，会直接导致信号大幅减弱，甚至出现假阴性；部分降解的蛋白片段还会引发非特异性结合，增加假阳性概率；
长期反复冻融：会导致蛋白整体变性聚集，样本出现浑浊沉淀，内参和靶标都无法检出，样本失效。
反复冻融还会导致每次实验的靶标含量不一致，直接造成实验重复性差，结果波动大，无法得到稳定可靠的结论。
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