结合此前关于大鼠肺泡上皮细胞培养、表型维持的相关背景，大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞（AEC-Ⅰ）本身体外极难长期存活，几乎无法稳定传代，仅能通过以下特殊操作实现有限传代：
前置准备
选用体外培养3天内、表型稳定的AEC-Ⅰ，使用含2%低血清+10ng/mL EGF的DMEM/F12培养基，提前预热所有试剂至37℃。
消化操作
弃去旧培养基，用无钙镁PBS轻洗细胞2次，加入0.05%低浓度胰酶，37℃消化1分钟，显微镜下观察细胞刚变圆就立即用培养基终止消化。
接种培养
1000RPM离心5分钟收集细胞，以不低于2×10⁵个/cm²的高密度接种，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养，24小时后换液。
关键注意事项
该细胞传代后仅能维持3-5天的AEC-Ⅰ表型，无法进行二次传代，需在传代后尽快完成实验，避免细胞发生去分化或凋亡。
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