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一、亮发光杆菌实验原理
由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。
二、实验方法
    推荐以下四种染色法，其中以湿墨水方法较简便，并且适用于各种有荚膜的细菌。如用相差显微镜检查则效果更佳。
1、负染色法：
（1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。
（2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。
（3）染色：在涂面上加复红染色液染色2—3min。
（4）水洗：用水洗去复红染液。
（5）干燥：将染色片放空气中晾干或用电吹风冷风吹干。
（6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴黑素，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素，使黑素沿玻片边缘散开，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。
（7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。
结果：背影灰色，菌体红色，荚膜无色透明。
 2、湿墨水法
（1）制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。
（2）加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。
（3）镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。
结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。
 3、干墨水法
（1）制菌液：加1滴6%葡萄糖液于洁净载玻片一端，挑少量胶质芽胞杆菌与其充分混合，再加1环墨水，充分混匀。
（2）制片：左手执玻片，右手另拿一边缘光滑的载玻片，将载玻片的一边与菌液接触，使菌液沿玻片接触处散开，然后以30度角，迅速而均匀地将菌液拉向玻片的一端，使菌液铺成一薄膜。
 （3）干燥：空气中自然干燥。
 （4）固定：用甲醇浸没涂片，固定1 min，立即倾去甲醇。
 （5）干燥：在酒精灯上方，用文火干燥。
 （6）染色：用甲基紫染1—2min。
 （7）水洗：用自来水轻洗，自然干燥。
 （8）镜检：先用低倍镜再高倍镜观察。
 结果：背景灰色，菌体紫色，荚膜呈一清晰透明圈。
 4、Tyler法
（1）涂片：按常规法涂片，可多挑些菌体与水充分混合，并将粘稠的菌液尽量涂开，但涂布的面积不宜过大。
（2）干燥：在空气中自然干燥。
（3）染色：用Tyler染色液染5—7min。
（4）脱色：用20%CuSO4水溶液洗去结晶紫，脱色要适度（冲洗2遍）。用吸水纸吸干，并立即加1—2滴香柏油于涂片处，以防止CuSO4结晶的形成。
（5）镜检：先用低倍镜再用高倍镜观察。观察完毕后注意用二甲苯擦去镜头上的香柏油。
 结果：背景蓝紫色，菌体紫色，荚膜无色或浅紫色。
 三、亮发光杆菌注意事项
1、加盖玻片时不可有气泡，否则会影响观察。
2、应用干墨水法时，涂片要放在火焰较高处并用文火干燥，不可使玻片发热。
3、在采用Tyler法染色时，标本经染色后不可用水洗，必须用20%CuSO4冲洗。
9005-00-9     Polyoxyl 10 Stearyl Ether    聚氧乙烯硬脂酸酯标准品    1g
9004-67-5     Methylcellulose (AS)    甲基纤维素标准品    1g
9004-57-3    Ethylcellulose    乙基纤维素标准品    1g
9004-34-6        微晶纤维素标准品    1g
9004-34-6    Powdered Cellulose (AS)    纤维素粉标准品    1g
9003-27-4     Polyisobutylene    聚异丁烯标准品    1g
9003-20-7     Polyvinyl Acetate     聚乙酸乙烯酯标准品    1g
9003-20-7     Polyvinyl Acetate Dispersion    聚乙烯乙酸酯分散体标准品    1g
90028-20-9        狭叶紫锥菊提取物标准品    1g
9001-73-4     Papain    木瓜酶标准品    1g
87-99-0     Xylitol     木糖醇标准品    1g
亮发光杆菌