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    亮发光杆菌代谢产物的差异情况

    点击次数:850次  更新时间:2018-04-09

    亮发光杆菌使用 HPLC 检测各菌株发酵产物次生代谢产物的差异情况,分析流动相为:乙腈-水(2‰的乙酸),流速:0.6 mL/min,均采用全波长扫描。HPLC 洗脱条件: 0–40 min : 10%–50% 乙腈梯度, 40–50 min:50%–75%乙腈梯度,50–60 min: 75%–100%乙腈梯度,60–68 min:纯乙腈洗脱, 70–90 min:10%乙腈平衡柱子。色谱柱为:分析柱为 Agilent 5 TC-C18(2) 250 mm×4.6 mm,SN: 588925-902,PN:509550。进样体积为 10 μL。

    利用 10 g的60–100目层析硅胶将制备好的粗提物进行拌样。然后,使用 60 g 的 200–300 目层析硅胶进行干法装柱,层析柱的规格为:4 cm×60 cm。待上样完成后,使用醇为洗脱剂进行梯度洗脱。首先使用500 mL 进行洗脱,再逐渐增加洗脱剂中甲醇的比例,当洗脱剂中: 甲醇的比例为20∶1 时(洗脱体积为 1.5 L),利用 HPLC 检测该组分,发现了一个化合物与∆PKS-3 发酵样品中所缺少的化合物的保留时间和特征吸收波长均一致,该份样品命名为SF1。当洗脱剂:甲醇的比例为 10∶1 时(洗脱体积为 1.2 L),将洗脱下来的组分利用HPLC 检测,发现含有 ∆PKS-9 中缺少的化合物,该份样品命名为SF2。

    接下来,亮发光杆菌将含有目标化合物的两份样品,分别使用 Sephadex LH-20 进行凝胶过滤色谱纯化 (色谱柱规格为 1.8 cm×160 cm),洗脱剂为甲醇,流速为 6–8 d/min,然后,分别将含有目标化合物的样品进行减压干燥后,继续分离纯化。其中,SF1 组分利用正相硅胶柱层析(色谱柱规格为 1.5 cm×50 cm),装柱硅胶为 18.5 g,洗脱剂为石油醚:丙酮=85:15,分别收集洗脱组分,将含有较纯化合物的组分进行减压干燥,zui终得到化合物 SF1 的纯品约 100 mg。SF2 组分再利用正相硅胶柱层析(色谱柱规格为 1.5 cm×50 cm),装柱硅胶为 15.0 g,利用:甲醇=10:1 进行洗脱,将含有较纯的目标化合物组分进行减压干燥,zui终得到化合物 SF2 的纯品为 20 mg。
    Ciclopirox Related Compound A    25mg    环吡酮相关物质A标准品        
    Ciclopirox Related Compound B    25mg    环吡酮相关物质B标准品    14818-35-0    
    Cilastatin Ammonium Salt    100mg    西司他丁铵标准品        
    Cilostazol    200mg    西洛他唑标准品    73963-72-1    
    Cimetidine    200mg    西咪替丁标准品    51481-61-9    
    Cimetidine Hydrochloride    200mg    盐酸西咪替丁标准品    70059-30-2    
    Cinoxacin    200mg    西诺沙星标准品    28657-80-9    
    Ciprofloxacin    200mg    环丙沙星标准品    85721-33-1    
    Ciprofloxacin Formamide    125mg    环丙沙星甲酰胺标准品    93594-39-9    
    Ciprofloxacin Hydrochloride    400mg    盐酸环丙沙星标准品    86393-32-0  
    亮发光杆菌 

     

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