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    PCR检测试剂盒“变性-退火-延伸”三个步骤的实现方法

    点击次数:4318次  更新时间:2021-03-23
       PCR检测试剂盒可用于猪全血、血清、淋巴结、脾脏、肌肉等样本中的非洲猪瘟病毒核酸检测。在非洲猪瘟病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含有非洲猪瘟病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
     
      与此同时,该试剂盒技术无需常规核酸提取,仅需对样品进行简单研磨、离心处理,即可开始后续核酸检测。在保证检测结果准确可靠的前提下,简化了检测步骤,将检测时间缩短至不到1小时,成为适合于屠宰场、养殖场和流通环节非洲猪瘟检测的技术。
     
      PCR检测试剂盒“变性-退火-延伸”三个步骤的实现方法是:
      1、变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,为下轮反应作准备;
     
      2、退火:退火也叫复性,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,在这个温度下,模板DNA单链能够与引物的互补序列配对结合;所谓引物,是一段已经确定好的DNA的片段,通过引物找到模板DNA的相应位置,也就是确定了复制的起点;
     
      3、延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按照碱基互补配对原则和半保留复制原理,就能合成一条新的与模板DNA链互补的复制链。
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