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    费氏弧菌发光杆菌转化的操作步骤

    点击次数:899次  更新时间:2017-09-27

    费氏弧菌发光杆菌转化操作步骤
    (1)事先将恒温水浴的温度调到42℃。
    (2)从-70℃ 超低温冰柜中取出一管(100μl)感受态菌,立即用手指加温融化后插入冰上,冰浴5~10min。
    (3) 加入5μl连接好的质粒混合液(DNA含量不超过100ng),轻轻震荡后放置冰上20min。
    (4) 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2min进行热休克,然后迅速放回冰中,静置3~5min。
    (5) 在超净工作台中向上述各管中分别加入500μl LB培养基(不含抗菌素)轻轻混匀,然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1h.
    (6) 在超净工作台中取上述转化混合液100~300μl,分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻,待其冷却后再涂)。
    (7) 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,8μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
    (8) 在涂好的培养皿上做上标记,先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后,再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
    (9) 在被费氏弧菌发光杆菌污染的桌面上喷洒70%乙醇,擦干桌面,写实验报告。
    (10)观察平板上长出的菌落克隆,以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
        含量:    进口/国产    去甲氧基姜黄素    20mg/支    英文名称    Demethoxycurcumin    规格:
    双去甲氧基姜黄素    含量:    进口/国产    双去氧基姜黄素    20mg/支    英文名称    Bisdemethoxycurcumin    规格:
    姜黄醇    含量:    进口/国产    莪术醇    20mg/支    英文名称    Curcumol    规格:
    槲皮素-3-半乳糖苷    含量:    进口/国产    金丝桃苷    20mg/支    英文名称    Hyperoside    规格:
        含量:    进口/国产    金丝桃素    20mg/支    英文名称    Hypericin    规格:
        含量:    进口/国产    绞股蓝皂苷    20mg/支    英文名称    Stevenleaf    规格:
    扁桃苷    含量:    进口/国产    苦杏仁苷    20mg/支    英文名称    Amygdalin    规格:
        含量:    进口/国产    苦参碱    20mg/支    英文名称    Matrine    规格:
    费氏弧菌发光杆菌

     

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