步骤一:青海发光杆菌接种
组织培养的接种是指将灭过菌的材料,在无菌的情况下,切成小块,放入培养基的过程。科研、部门的接种工作,多在无菌室或超净工作台上进行,中学可制作接种箱,在箱内进行接种。接种的方法步骤如下:
①在无菌室或接种箱中放好接种时所需要的酒精灯、贮存70%酒精和棉球的广口瓶、各种镊子、接种针、解剖刀、手术剪、火柴、培养基等。
②在无菌室或接种箱内用紫外灯灭菌(无菌室照射20~50分钟,接种箱照射15分钟)。
③放入已灭菌的接种材料(用培养皿盛取)。同时,操作人员用酒精棉球擦手,并对接种工具用酒精灯火焰烧灼。
④用手术刀片将材料切割成若干片段,并迅速接种入培养基中。接种时,锥形瓶(或试管)应斜向火焰,在酒精灯火焰附近操作。
⑤材料接种好后,将锥形瓶瓶口在酒精灯火焰上转动烧一遍,盖好瓶盖,注明材料名称及接种日期。
材料接种后,应置于26~28℃的培养室中进行培养。
步骤二:青海发光杆菌植株诱导
本阶段是组织培养中zui重要的一环。在培养基中植物激素的作用下,外植体通过三条途径迅速增殖,这就是侧芽增殖、诱导不定芽的形成和诱导胚状体的形成。
* RT 5克 乙酸铈
* RT,避光 1克 2-氨基联苯
* 5克 硼氢化钠
* RT 5克 异丙胺
* RT 1克 脱脂奶粉
* 2~8℃,避光 1克 肝浸粉(牛)
* RT,避光 25克 琼脂粉
* RT,避光 100克 小牛浸膏粉
* RT,避光 5克 三号胆盐
* RT 100克 猪胆盐
* RT,避光 100克 酶水解干酪素
* 100克 小牛血清
青海发光杆菌
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