NOD样受体1elisa试剂盒是一种用于检测生物样本中NOD1蛋白表达水平的免疫学检测工具,在感染免疫、炎症反应和细胞信号转导研究中具有重要应用价值。 一、工作原理:特异性抗体识别与信号放大
NOD样受体1elisa试剂盒基于酶联免疫吸附测定(ELISA)技术,通过双抗体夹心法检测NOD1蛋白。其核心原理是:
1、固相抗体捕获:微孔板预先包被针对NOD1蛋白的特异性捕获抗体,样本中的NOD1蛋白与之结合形成固相复合物。
2、检测抗体识别:加入生物素标记的检测抗体,与NOD1蛋白的另一表位结合,形成"抗体-抗原-抗体"夹心结构。
3、信号放大系统:加入酶标记的链霉亲和素,与生物素结合形成复合物。加入显色底物,酶催化底物产生可测量的颜色变化,颜色深浅与样本中NOD1浓度成正比。
4、该技术利用抗原-抗体特异性结合和酶催化信号放大,具有高灵敏度和良好的特异性。
二、实验方法:标准化操作流程
1、样本准备
收集细胞培养上清、血清或组织匀浆等样本,避免反复冻融。NOD样受体1elisa试剂盒支持直接检测裂解液,简化前处理步骤。
2、加样与孵育
将样本或标准品加入预包被抗体的微孔板中,室温或4℃孵育1-2小时,使NOD1蛋白与固相抗体充分结合。
3、洗涤与检测抗体结合
洗涤去除未结合物质后,加入生物素标记的检测抗体,再次孵育使抗体与NOD1蛋白结合。
4、信号标记与显色
加入酶标记的链霉亲和素,孵育后洗涤,加入显色底物。避光反应一定时间后终止反应。
5、吸光度测定与数据分析
使用酶标仪在特定波长下测定各孔吸光度值。通过标准曲线计算样本中NOD1浓度,通常以OD值对标准品浓度作图,建立线性回归方程。