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    如何使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子

    点击次数:43  更新时间:2025-08-25
    巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是一种19.02kDa的造血生长因子,含有162个氨基酸残基。该蛋白的活性:形式为同源二聚体,由成骨细胞分泌。M-CSF可控制单核细胞、巨噬细f胞和骨髓祖细胞的生成、分化和功能。M-CSF能够通过结合其受体CSF-1R激活 CSF-1信号通路。
    一、体外细胞培养应用
    ‌原代巨噬细胞诱导‌:
    推荐浓度20ng/ml,与RANKL(30ng/ml)联用可诱导破骨细胞分化‌
    培养体系需含10%胎牛血清的α-MEM培养基,37℃ CO₂条件下培养
    ‌细胞系维持‌:
    维持培养时建议5-10ng/ml,每2-3天换液
    贴壁细胞传代前需用含EDTA的胰酶消化
    二、体内实验应用
    ‌皮下注射方案‌:
    常用剂量100-200μg/kg,每日1次连续3天
    注射部位建议选择肩胛骨间区或腹股沟
    ‌腹腔注射方案‌:
    适用于快速动员,剂量可调整至50μg/kg
    需确认无菌操作,避免腹腔感染
    三、质量控制要点
    ‌活性验证‌:
    建议通过CCK-8法检测细胞增殖活性(EC50约5-10ng/ml)
    流式检测CD11b和F4/80表达验证分化效率
    ‌储存条件‌:
    冻干粉4℃可保存1个月,-20℃长期保存
    溶解后分装保存,避免反复冻融
    四、注意事项
    ‌无菌操作‌:
    所有操作需在生物安全柜内进行
    建议使用0.22μm滤膜过滤
    ‌剂量调节‌:
    首次使用建议进行剂量梯度测试(5-50ng/ml)
    高浓度可能诱导细胞凋亡
     
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