巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是一种19.02kDa的造血生长因子,含有162个氨基酸残基。该蛋白的活性:形式为同源二聚体,由成骨细胞分泌。M-CSF可控制单核细胞、巨噬细f胞和骨髓祖细胞的生成、分化和功能。M-CSF能够通过结合其受体CSF-1R激活 CSF-1信号通路。
一、体外细胞培养应用
原代巨噬细胞诱导:
推荐浓度20ng/ml,与RANKL(30ng/ml)联用可诱导破骨细胞分化
培养体系需含10%胎牛血清的α-MEM培养基,37℃ CO₂条件下培养
细胞系维持:
维持培养时建议5-10ng/ml,每2-3天换液
贴壁细胞传代前需用含EDTA的胰酶消化
二、体内实验应用
皮下注射方案:
常用剂量100-200μg/kg,每日1次连续3天
注射部位建议选择肩胛骨间区或腹股沟
腹腔注射方案:
适用于快速动员,剂量可调整至50μg/kg
需确认无菌操作,避免腹腔感染
三、质量控制要点
活性验证:
建议通过CCK-8法检测细胞增殖活性(EC50约5-10ng/ml)
流式检测CD11b和F4/80表达验证分化效率
储存条件:
冻干粉4℃可保存1个月,-20℃长期保存
溶解后分装保存,避免反复冻融
四、注意事项
无菌操作:
所有操作需在生物安全柜内进行
建议使用0.22μm滤膜过滤
剂量调节:
首次使用建议进行剂量梯度测试(5-50ng/ml)
高浓度可能诱导细胞凋亡